粉色视频入口,在线观看国产三级片视频,精品人妻伦一二三区久久,亚洲另类欧美综合图片区

15522676233
TECHNICAL ARTICLES

技術(shù)文章

當(dāng)前位置:首頁技術(shù)文章NGS測序之文庫構(gòu)建

NGS測序之文庫構(gòu)建

更新時間:2024-04-08點(diǎn)擊次數(shù):2608

由于二代測序讀長的限制,不可能一下將一個很長的基因序列測通,因此需要先將長基因序列隨機(jī)片段化成小片段,這樣的話,這些片段就可以覆蓋整個基因組。所以需要構(gòu)建文庫。

一、文庫構(gòu)建的步驟

文庫構(gòu)建大致步驟類似,但是各有各自du特的點(diǎn),例如,RNAseqmiRNA,lncRNA,mRNA方法各有差異,具體方法以后有機(jī)會再補(bǔ)充。這里以IlluminaPE文庫為例,其流程圖如下圖。

6-2.png


二、文庫構(gòu)建詳細(xì)步驟

1DNA片段化 (Fragment DNA

使用超聲、酶或者加熱的方式將DNA樣品打碎成小片段,一般在300 ~ 800bp之間除非有特殊要求。

2末端修復(fù)(End Repair

補(bǔ)平片段化時導(dǎo)致的不平末端。

33' 末端加“A" A-tailing

3‘ 末端加A,轉(zhuǎn)換為粘性末端,與adapter 互補(bǔ)配對,因?yàn)?/span>adapter 3‘端有一個突出的T。

4)接頭連接( ligation adaptor

這一步有兩種不同的添加策略如下圖。

6-3.png

左邊的圖是直接在fragment DNA的兩端直接加上full Y-adapter, adapter中已經(jīng)包括了和P5/P7 oligo互補(bǔ)的序列, index, 以及Read1/Read2的測序引物。

右邊的圖是先在fragment DNA的兩端加上PE adapter, 然后再引入和P5/P7 oligo互補(bǔ)配對的序列以及index序列,分兩步:

A. PE adapter添加利用堿基互補(bǔ)配對的原則,加上PE adapterPE adpater中一部分是建庫PCR富集時候需要用的引物序列,另一部分是測序時需要用的引物。

B.PCR 添加 index,P5,P7

Index也稱barcode,用來區(qū)分不同樣本的文庫,因?yàn)闇y序儀一個lane產(chǎn)生數(shù)據(jù)量若干Gb,為了最da化利用測序儀,一次上機(jī)常會進(jìn)行多個樣本文庫混合測序,在后續(xù)分析時,Index用來區(qū)分?jǐn)?shù)據(jù)是來自哪個樣本。

      PCR富集目的片段

進(jìn)行PCR擴(kuò)增,循環(huán)數(shù)與投入的DNA量有關(guān),使得文庫達(dá)到上機(jī)濃度。

擴(kuò)增文庫大小質(zhì)檢

使用Agilent 2100對文庫的insert size進(jìn)行檢測。

文庫濃度定量

Qubit3.0 進(jìn)行初步定量 Q-PCR對文庫的有效濃度進(jìn)行準(zhǔn)確定量,至此文庫構(gòu)建結(jié)束。

更多有關(guān)NGS測序之文庫構(gòu)建的相關(guān)內(nèi)容,請聯(lián)系BioDynami建庫試劑盒代理商——北京百奧創(chuàng)新科技有限公司

image.png














聯(lián)系方式

15522676233

(全國服務(wù)熱線)

北京市海淀區(qū)溫泉鎮(zhèn)創(chuàng)客小鎮(zhèn)社區(qū)配套商業(yè)樓

3007606172@qq.com

關(guān)注我們

Copyright © 2025北京百奧創(chuàng)新科技有限公司 All Rights Reserved   工信部備案號:京ICP備17019404號-2

技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)   管理登錄   sitemap.xml

關(guān)注

聯(lián)系
聯(lián)系
頂部
男人操女人国产精品麻豆| 四虎影视4hu4虎成人| 啊啊啊想要被插进去视频| 男生女生差鸡视频在线看| 色综合 图片区 小说区| 无码人妻精品一区二区三区不卡 | 日韩午夜福利成人小视频| 又大又粗又硬放不进去了| 国内三级片在线| 国产精品综合Av一二三| 大鸡巴 操 在线 视频| 久久久久久无码高清视频| 亚洲av永久无码精品| 久久爱亚洲一区二区三区| 他的女的b喷出水b网站| 色吊丝av熟女中文字幕| 区产品乱码芒果精品P站| 荷兰黑妞的大黑逼大肥奶| 懂色一区二区三区精品视频| 白丝袜小舞被撕开裆部图片| 欧美一区二区三区亚洲一区| 亚洲有码第2页| 99久久精品毛片免费播放高潮| 一级片一区二区中文字幕| 国产亚洲sss在线观看| 久久久久国产一区二区区| www,插屄屄| 同房后阴道流黄色分泌物| 双飞人妻和她闺蜜完整短| 黑人巨大进入黑人孕妇| 老头大阴茎视频| 欧美老熟妇丰满人妻啪啪| 2022国产精品永久在线| 精品国产污网站免费入口| 动漫美女露阴蒂| 男生和女生日逼视频观看| 亚洲精品乱码久久久久久不卡 | 亚洲欧美色?区二区三区| 初爱视频教程| 久久精品人人妻一区二区三| 成人网站老鸭窝|