生物發(fā)光實(shí)驗(yàn)

1.確定螢光素酶

常見(jiàn)的熒光素酶包括螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase，Fluc）、海洋蛋白質(zhì)熒光素酶（Renilla luciferase，Rluc）和高司氏熒光素酶。它們?cè)谔囟l件下都能催化各自的底物產(chǎn)生相應(yīng)的光，而無(wú)需外部激發(fā)器。其中，Fluc是應(yīng)用最為廣泛的熒光素酶。

推薦使用Goldbio的D-Luciferin做為螢火蟲熒光素酶的底物

2.構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)螢光素酶細(xì)胞株

穩(wěn)轉(zhuǎn)株即穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株，指的是基于某一細(xì)胞系構(gòu)建的持續(xù)過(guò)表達(dá)或干擾某特定基因的細(xì)胞系。慢病毒感染-藥物篩選法是目前廣泛應(yīng)用的穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建方法，具有高效整合、目標(biāo)細(xì)胞廣泛等特點(diǎn)。

3.驗(yàn)證穩(wěn)轉(zhuǎn)株

構(gòu)建得到穩(wěn)轉(zhuǎn)株后，可以進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)以驗(yàn)證Fluc穩(wěn)轉(zhuǎn)株效果。可以將生長(zhǎng)良好的Fluc細(xì)胞消化，隨后用培養(yǎng)基稀釋成系列梯度濃度并分別接種于96孔板中，每孔100 μL，每個(gè)濃度設(shè)置三平行孔。

4.穩(wěn)轉(zhuǎn)株注射動(dòng)物

成功構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)株后，即可進(jìn)行動(dòng)物移植模型構(gòu)建。

5. 注射底物

注射的細(xì)胞一般會(huì)在2-3周成瘤（具體時(shí)間根據(jù)細(xì)胞種類，接種數(shù)量，細(xì)胞活力會(huì)有所不同），可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行一定處理。

6.活體成像

活體成像建議直接使用帶有麻醉裝置的小動(dòng)物活體成像儀，這樣操作更方便，而且可以更準(zhǔn)確的控制小鼠麻醉的情況。如儀器不帶麻醉裝置，也可自行麻醉小鼠后置于小動(dòng)物活體成像儀中進(jìn)行成像。檢測(cè)途中要注意防止小鼠中途蘇醒而離開成像臺(tái)。

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